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應(yīng)用知識(shí)

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微生物培養(yǎng)之甲烷氧化菌細(xì)菌培養(yǎng)

發(fā)布時(shí)間:2025/11/8點(diǎn)擊次數(shù):51

?甲烷氧化菌是一類能夠利用甲烷作為碳源和能量的特殊微生物。它們廣泛分布于土壤、濕地和海洋等環(huán)境中,是自然界中控制甲烷排放的關(guān)鍵生物過(guò)濾器。研究該類微生物對(duì)于緩解溫室效應(yīng)、開(kāi)發(fā)生物減排技術(shù)以及理解全球碳循環(huán)過(guò)程具有重要科學(xué)和應(yīng)用價(jià)值。


一、常用配置:

  • 溫度:25~30℃

  • 轉(zhuǎn)速:120~180rpm

  • 培養(yǎng)瓶規(guī)格:100~250ml


二、方案原理:

典型場(chǎng)景:甲烷氧化菌的富集培養(yǎng)研究


配置參數(shù)與原理:

  • 溫度:25~30℃

甲烷氧化菌是一類對(duì)溫度條件較為敏感的微生物,其生長(zhǎng)適宜溫度因菌種差異而有所不同。通常來(lái)說(shuō),這類微生物最適宜在25℃至30℃的環(huán)境中生長(zhǎng)。當(dāng)溫度低于20℃或超過(guò)35℃時(shí),其生長(zhǎng)狀態(tài)、代謝活性及生理功能均可能受到抑制。多項(xiàng)研究結(jié)果表明,在25℃–30℃的培養(yǎng)條件下,甲烷氧化菌能夠表現(xiàn)出較高的甲烷氧化效率與較快的生長(zhǎng)速率。因此,在溫室培養(yǎng)土中,將溫度控制在該區(qū)間內(nèi),有助于優(yōu)化其培養(yǎng)效果。

  • 轉(zhuǎn)速:120~180rpm

甲烷培養(yǎng):采用250m1三角搖瓶,裝100m無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基,菌體接種量10%(V/V),使用帶有玻璃管的膠塞封口。在上層的空氣中置換入甲烷,甲烷和空氣體積比為1:1-1:5,28℃、180rpm 空氣浴搖床培養(yǎng)。每 24h 換氣一次。

提速方法:1.可以加入甲醇,提供充分的碳源,從而提高細(xì)胞密度。最佳添加量為0.05%(V/V)。2.可以加入石蠟油,作為一種甲烷傳遞體,提高甲烷的利用率。最佳添加量為2.5%(V/V)


文獻(xiàn)出處:[1]辛嘉英, 董靜, 梁洪野, 張帥, 王艷, & 夏春谷. (2010). 甲烷氧化菌的高密度培養(yǎng).

其他實(shí)驗(yàn)要求也有提到:“樣本在30℃、120/min的恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)恒溫振蕩浸泡48h后取出,這樣的操作。"

  • 培養(yǎng)瓶規(guī)格:100~250ml

在實(shí)驗(yàn)室搖瓶培養(yǎng)中,選擇100-250 mL容器(如錐形瓶)并控制裝液量(如50 mL/250 mL),是為了優(yōu)化氧氣和甲烷的傳輸效率。該規(guī)格能在搖動(dòng)時(shí)形成最佳氣液界面,提供充足氣體交換,防止濺出,并兼顧操作便利性與成本,是滿足這類高耗氧微生物生長(zhǎng)需求的理想規(guī)模。



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